鸡毒支原体（MG）核酸检测试剂盒（荧光-PCR法）

沪峥PCR优势：

    1.   特异性：所有产品使用的引物均经过详尽的生物信息学分析，经过GenBank及自建庞大数据库的比对，确保
所用的每一条引物均为种属或血清型特异的基因序列区段，可实现对细菌种属及血清型的特异检测。

    2.   重现性：该系列所有产品均经过大量实验菌株的验证。

    3.   灵敏性：该系列产品可实现对检测菌的高灵敏检测，当样品中细菌的浓度达到103cfu/ml时，可实现对其的直接检测，无需繁琐的增菌过程。

    4.   实用性：检测范围广，涵盖了对人体危害较为严重的17种呼吸道及肠道致病菌，可实现对临床样品及其他环境取样的快速检测，整个检测过程为3-4个小时。

鸡毒支原体(MG)核酸检测试剂盒(荧光-PCR法)

通用名称：鸡毒支原体(MG)核酸检测试剂盒(荧光-PCR法)

Name  ：MG  Detection Kit (Real-Time PCR Method)

 【包装规格】50T/盒

   【预期用途】

鸡毒支原体(MG)核酸检测试剂盒(荧光-PCR法)引起鸡滑液囊炎，该病是鸡的一种急性或慢性传染病，以侵害关节的滑液囊膜及腱鞘为主，引起关节渗出性滑膜炎、腱鞘炎及跗关节和脚垫肿胀^[1]，此外还会造成生长发育迟缓、胴体降级、产蛋下降等，并且还与呼吸道疾病相关，给养鸡业造成巨大经济损失^[2]。

本试剂盒适用于检测鼻腔、气囊组织、鼻腔、食管、气管、关节渗出物等样本中的鸡滑液囊支原体，用于鸡毒支原体(MG)感染的辅助诊断。

 【检验原理】

本试剂盒采用TaqMan探针法实时荧光PCR技术，设计一对鸡毒支原体(MG)特异性引物，结合一条特异性探针，用荧光PCR技术对鸡毒支原体(MG)核酸进行体外扩增检测，用于临床上对可疑感染者的病原学诊断。

鸡毒支原体(MG)核酸检测试剂盒(荧光-PCR法)【试剂组成】

1）不同批号试剂不能混用。

2）试剂盒内各试剂组份足够包装规格所标示的检测次数。

【储存条件及有效期】

-20℃±5℃，避光保存、运输、反复冻融次数不超过5次，有效期12个月。

 适用仪器】

ABI 、安捷伦MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf等系列荧光定量PCR检测仪。

 标本采集】

    病死或扑杀禽，从鼻腔、气管或气囊、关节渗出物；活禽取鼻腔、食管、气管拭子、注射器穿刺吸取关节液

 【保存和运输】

上述标本短期内可保存于-20℃，长期保存可置-70℃，但不能超过6个月，标本运送应采用2~8℃冰袋运输，严禁反复冻融。

鸡毒支原体(MG)核酸检测试剂盒(荧光-PCR法)【使用方法】

样本前处理

组织样品：每份组织分别从3个不同的位置称取样品约1g，手术剪剪碎混匀后取0.5g于研磨器中研磨，加入1.5mL生理盐水后继续研磨，待匀浆后转至1.5mL灭菌离心管中，8000rpm离心2min，取上清液100μL于1.5mL灭菌离心管中；液体样品，直接取100μL提取

 DNA提取

• DNA的提取也可以采用（离心柱提取法），请严格按照试剂盒说明书进行操作。

 试剂配制（试剂准备区）

根据待检测样本总数，设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照；样品每满7份，多配制1份)，每测试反应体系配制如下表：

 加样（样本处理区）

将步骤1提取的DNA、阳性质控品、阴性质控品各取4μL，分别加入相应的反应管中，盖好管盖，混匀，短暂离心。

 PCR扩增（核酸扩增区）

• 将待检测反应管置于荧光定量PCR仪反应槽内；
• 设置好通道、样品信息，反应体系设置为25μL；

荧光通道选择： 检测通道（Reporter Dye）FAM， 淬灭通道（Quencher Dye）NONE，ABI系列仪器请勿选择ROX参比荧光，选择None即可。

• 推荐循环参数设置：

结果分析判定

设置Baseline和Threshold：一般直接按机器自动分析的结果分析，当曲线出现整体倾斜时，根据分析后图像调节Baseline的start值(一般可在3~15范围内调节)、stop值(一般可在5~20范围内调节)，以及Threshold的Value值(上下拖动阈值线至高于阴性对照)，重新分析结果。

结果判断

阳性：检测通道Ct值≤35，且曲线有明显的指数增长曲线；

可疑：检测通道35<Ct值≤38，建议重复检测，如果检测通道仍为35<Ct值≤38，且曲线有明显的增长曲线，判定为阳性，否则为阴性；

阴性：样本检测结果Ct值>38或无Ct值。

质控标准

阴性质控品：Ct>38或无Ct值显示；

阳性质控品：扩增曲线有明显指数生长期，且Ct值≤32；

以上条件应同时满足，否则实验视为无效。

 检测方法的局限性

• 样本检测结果与样本收集、处理、运送以及保存质量有关；
• 样本提取过程中没有控制好交叉污染，会出现假阳性结果；
• 阳性对照、扩增产物泄漏，会导致假阳性结果；
• 病原体在流行过程中基因突变、重组，会导致假阴性结果；
• 不同的提取方法存在提取效率差异，会导致假阴性结果；
• 试剂运输，保存不当或试剂配制不准确引起的试剂检测效能下降，出现假阴性或定量检测不准确的结果；
• 本检测结果仅供参考，如须确诊请结合临床症状以及其他检测手段。

 【注意事项】

• 所有操作严格按照说明书进行；
• 试剂盒内各种组分使用前应自然融化，*混匀并短暂离心；
• 反应液应避光保存；
• 反应中尽量避免气泡存在，管盖需盖紧；
• 使用一次性吸头、一次性手套和各区工作服；
• 样本处理、试剂配制、加样需在不同区进行，以免交叉污染；
• 实验完毕后用10%次氯酸或75%酒精或紫外灯处理工作台和移液器；
• 试剂盒里所有物品应视为污染物对待，并按照《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。